Расшифровка чувствительности к антибиотикам: о чем говорит анализ?

Высокий уровень приоритетности

  1. Enterococcus faecium
  2. Staphylococcus aureus
  3. Helicobacter pylori
  4. Campylobacter spp.
  5. Salmonellae
  6. Neisseria gonorrhoeae

Бактерии второй группы объединены по признаку повсеместного распространения, высокой социально-экономической значимости вызываемых ими заболеваний и быстрого развития резистентности к основным антибиотикам, используемым для их эрадикации, однако в резерве еще остается один или несколько эффективных препаратов.

Enterococcus faecium

E. faecium входит в состав нормальной микрофлоры кишечника, но в то же время является условно-патогенным микроорганизмом. У ослабленных больных может вызывать инфекции мочевыводящих путей, раневую инфекцию, сепсис и эндокардит. Резистентен к аминогликозидам, пенициллинам и цефалоспоринам. Беспокойство вызывает снижение чувствительности к ванкомицину — до 72 % в отдельных популяциях. Большинство штаммов E. faecium чувствительны к линезолиду, тигециклину, даптомицину.

Staphylococcus aureus

Золотистый стафилококк, колонизирующий кожу и слизистые оболочки, способен вызывать тяжелые инфекции кожи и мягких тканей, респираторные, раневые инфекции, остеомиелит, сепсис, артрит, эндокардит. Недавнее появление и распространение ванкомицин- и гликопептид-резистентных штаммов в дополнение метициллин-резистентному S. aureus значительно сужает выбор антибактериальных препаратов, однако у возбудителя сохраняется чувствительность к аминогликозидам, эритромицину, тетрациклину, ко-тримоксазолу, линезолиду.

Helicobacter pylori

Тревогу ВОЗ вызывает увеличение случаев резистентности всем известной H. pylori к кларитромицину, что сказывается на эффективности традиционных схем эрадикационной терапии, в том числе и в России. Перед эрадикацией ВОЗ рекомендует проверить чувствительность бактерии к этому антибиотику, при выявлении устойчивости — использовать схемы без него — с метронидазолом, тетрациклином или рифаксимином, а также добавлять висмута трикалия дицитрат.

Campylobacter spp.

Бактерии рода Campylobacter удерживают первое место в мире по гастроэнтеритам, которые у большинства населения планеты протекают в легкой форме, но представляют опасность для маленьких детей, беременных, стариков и иммунокомпрометированных больных. В большинстве случаев достаточно регидратации и восстановления электролитного баланса, антибактериальную терапию назначают при тяжелом течении. Проблемой является резистентность Campylobacter к фторхинолонам, основному средству борьбы с кишечной микрофлорой, и макролидам. Устойчивость к этим препаратам, впрочем, сильно варьирует от страны к стране — от менее 5 % в Финляндии до более 90 % в Индии. В Европе и России эритромицин всё еще остается препаратом выбора. По данным микробилогических исследований, в России также еще вполне актуальны фторхинолоны. В запасе для особо тяжелых случаев с осложнениями — гентамицин и карбапенемы.

Salmonellae

Представители рода сальмонелл также вызывают набор кишечных инфекций, от легкого энтерита до брюшного тифа. Большинство этих бактерий уже резистентны к бета-лактамам, аминогликозидам, тетрациклинам, хлорамфениколу и ко-тримоксазолу. Устойчивость к фторхинолонам растет во всем мире, но пока не привела к полной бесполезности этих препаратов, они остаются антибиотиками выбора, наравне с макролидами и цефалоспоринами третьего поколения. Антибактериальной терапии требуют только тяжелые случаи кишечных инфекций и, конечно, брюшной тиф и паратифы.

Neisseria gonorrhoeae

Гонорея из неприятной, но относительно легко излечимой болезни эволюционировала в глобальную медицинскую проблему. Гонококк потерял чувствительность к пенициллинам, тетрациклинам, сульфаниламидам и фторхинолонам.

Особое опасение вызывает появление и постепенное распространение штаммов, резистентных к цефалоспоринам (цефтриаксону), долгое время служивших безотказным средством борьбы с этой инфекцией. При резистентной к стандартным схемам лечения гонорее рекомендовано использовать комбинацию азитромицина с высокими дозами цефтриаксона. В России гонококк также практически резистентен к фторхинолонам, но пока сохраняет 100 %-ную чувствительность к цефтриаксону.

Разновидности фагов

Различают две группы бактериофагов в зависимости от скорости уничтожения бактериальных колоний.

Умеренные

Уничтожают только некоторые бактериальные клетки, вступая с выжившими в своеобразный симбиоз. ДНК такого бактериофага встраивается в ДНК бактерии (так называемый профаг) и передается будущим бактериальным поколениям. Такие культуры бактерий называют лизогенными – в определенный момент они дают жизнь новым свободным бактериофагам, которые переходят из нуклеоида в цитоплазму и способны лизировать бактерии соседних колоний. При этом чувствительность к бактериофагу у лизогенной колонии отсутствует.

Вирулентные

Лизируют все бактериальные клетки, давая жизнь новым фагам, которые уничтожают колонию в течение 30-40 минут, после чего частично гибнут, а частично инкапсулируются и переходят в спящее состояние.

Как определяют чувствительность к фагам

Определение чувствительности бактериальных культур к бактериофагам проводят при помощи микробиологических методов – на твердых или полужидких питательных средах. Обычно используют один моновалентный и два поливалентных фага.

Определение чувствительности колоний к бактериофагу может использоваться для различных целей:

  1. Фаготипирование. Определение штаммов бактерий по их чувствительности к фагам. Используется при проведении эпидемиологических исследований.
  2. Фагоидентификация. Определение видов бактерий по их отношению к фагам.
  3. Фагодиагностика. Выделение фагов из организма пациента, свидетельствующее о наличии соответствующих бактерий.
  4. Фагопрофилактика. Применяется при опасности заражения дизентерией. Чувствительность возбудителей к фагам позволяет проводить эффективную профилактику в очагах этого заболевания.
  5. Фаготерапия. Наиболее часто применяется для лечения заболеваний, вызванных стафилококком, шигеллами, протеем.

Применение бактериофагов показано только в случае, если выполнено определение чувствительности к бактериофагу, иначе этот дорогостоящий метод может не дать ожидаемого эффекта. Такие препараты используют для лечения инфекций у новорожденных, гнойных ран, а также инфекций мочевыводящей системы – уретритов, пиелонефритов, циститов.

Подготовка к анализам

По статистике, около 80% ошибок в лабораторных исследованиях вызваны ошибками при сборе и транспортировке материалов для обследования. Как правило, забор осуществляет медицинский персонал, но некоторые биоматериалы больной собирает сам. Поэтому при подготовке к сдаче анализа необходимо соблюдать следующие общие правила:

  • Во время забора биоматериала требуется исключить попадание в него антисептических или дезинфицирующих соединений, обсеменения бактериями и иными организмами. Для этого инструментарий и посуда для сбора должны быть стерильными.
  • На результаты посева на антибиотики влияет прием пациентом антибактериальных и иных медикаментозных препаратов. О терапии необходимо сообщить назначившему анализ врачу, применение лекарств необходимо приостановить за срок не менее 10 суток до назначенной даты анализа.
  • Материалы для обследования должны быть доставлены в лабораторию в специальных герметичных контейнерах в максимально короткие сроки. Во время транспортировки собранные биологические жидкости должны быть защищены от воздействия света, температур, механического воздействия.

Норма и расшифровка для бак посева на флору

Расшифровка результатов посева проводится в микробиологической лаборатории. Для этого проводится как качественный, так и количественный подсчет. При количественном расчете используется понятие 4 степеней обсемененности:

  1. Микроорганизмы растут слабо, как правило, в жидкой питательной среде.
  2. Питательная среда для роста более плотная, на чашке Петри можно насчитать около 10 колоний.
  3. Наблюдается обильный рост микроорганизмов, образуется около 100 колоний.
  4. Данная степень свидетельствует о сильном заражении, микроорганизмы образуют более 100 колоний на чашке Петри.

При диагностировании 1 или 2 степени зараженности можно говорить о наличии условно-патогенной микрофлоры, как правило, это ещё не говорит о факте развития заболевания. Такой результат можно получить, если больной не соблюдал все необходимые правила подготовки к анализу (нарушил правила забора материала, использовал нестерильную посуду или инструменты, не соблюдал правил личной гигиены).

Однако, если была установлена 3 или 4 степень, то можно с точность утверждать об определенной форме болезни. Именно в этом случае устанавливают конкретные патогенные микроорганизмы, проводят анализ их резистентности к антибиотикам и получив комплексный результат назначают лечение. Этот метод называется антибиотикограмма.

Важно отметить, что во время взятия мазка на микрофлору у беременных женщин могут наблюдаться небольшие превышения нормы. Не стоит беспокоиться из-за этого, нужно через время провести повторный анализ, который покажет либо прекращения роста ранее выявленных микроорганизмов, либо увеличение их количества

Посев на микрофлору очень популярный на сегодня метод диагностики. Он используется в любом направлении медицины (гинекологии, урологии, ЛОР-практике и др.). Проводится для диагностики инфекционных заболеваний человека.

Является достаточно информативным, благодаря нему можно с точностью установить возбудителя, что не удается сделать другими современными методиками. Имея на руках результаты бактериологического исследования врач может подобрать эффективные препараты для лечения того или иного заболевания.

При сдаче биоматериала на анализ очень важно соблюдать все необходимые требования, это поможет повысить точность результатов

Анализ спермы на чувствительность к антибиотикам

Представляет собой бактериологическое исследование эякулята спермы с дальнейшим подбором чувствительных антибиотиков и их концентраций. Чаще всего проводится при лечении бесплодия, и других заболеваний мужской половой системы. В том случае, если заболевание сопровождается инфекционным процессом. Основной причиной мужского бесплодия является в большинстве случаев именно инфекция. Обычно изначально проводят спермограмму. По результатам устанавливают оплодотворяющую способность спермы. Если в этом анализе обнаружено большое количество лейкоцитов, можно говорить о воспалительном процессе. При этом обычно сразу же назначают микробиологический анализ, поскольку воспаление почти всегда сопровождается инфекцией. Уже на основании полученных результатов подбирают соответствующую терапию. Исследование обычно назначает андролог.

Также поводом для проведения анализа служит простатит, венерические заболевания. Назначают и в том случае, если у партнерши обнаружено венерическое заболевание.

В основе правильного анализа лежит, прежде всего, правильный забор биологического материала. Забирают материал в специальные сосуды с широким горлом. Температура хранения должна соответствовать температуре тела человека. В таком случае материал может храниться не более часа. В замороженном виде может храниться не более суток. Во время приема антибиотиков посев сдавать нецелесообразно, это меняет клиническую картину. Обычно посев сдают до того, как начат курс антибиотикотерапии. Либо прием лекарств прекратить за 2-3 дня до анализа.

Затем производят его посев на питательную среду. Инкубируют в термостате в течение 1-2 суток. После выделяют чистую культуру, затем проводят идентификацию, определяют чувствительность, а также тип и скорость роста каждой колонии. Чувствительность к антибиотикам определяется в случае выявления патогенных микроорганизмов. В среднем анализ делается 5-7 дней.

[], [], [], [], [], [], [], [], []

Основные понятия

(МИК)
минимальная
ингибирующая (подавляющая) концентрация

наименьшая
концентрация антибиотика,которая
подавляет видимый
рост исследуемого
микроорганизма
in vitro
(в бульонных
или на агаровых питательных
средах) в стандартных условиях постановки
опыта и выражается в мкг/мл (мг/л) или
ед/мл.

Минимальная
бактерицидная концентрация (МБК)


наименьшая концентрация антибиотика,
которая при исследовании in
vitro
вызывает
гибель 99,9% микроорганизмов от исходного
уровня в течение определённого периода
времени.

Чувствительный
микроорганизм 
штамм микроорганизма, который не имеет
механизмов резистентности к данному
препарату. Его его на питательной среде
прекращается при использовании
антибиотика в терапевтической дозе.

Умеренно-резистентный
микроорганизм 
штамм микроорганизма, рост которого
на питательной среде прекращается
только при использовании антибиотика
в высшей дозе. Лечение инфекций,
вызываемых умеренно-резистентными
микроорганизмами, проводится при
отсутствии альтернативных препаратов,
высшей (максимальной терапевтической)
дозой антибиотика.

Резистентный
микроорганизм

штамм микроорганизма, который имеет
механизмы резистентности к данному
препарату. Его рост на питательной
среде прекращается лишь при использовании
очень высоких концентраций препарата,
которые нельзя создать в организме
из-за их высокой токсичности. При лечении
инфекций, вызванных этим микроорганизмом,
клинический эффект от терапии отсутствует
даже при использовании высшей дозы
антибиотика. При этом могут наблюдаться
побочные действия антибиотика.

Показания
к определению чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам:

  1. определение
    чувствительности к новому антибиотику,
    рекомендуемому к применению;

  2. периодический
    мониторинг антибиотикорезистентности
    в отдельных медицинских центрах
    и в различных
    географических регионах с
    целью наблюдения за распространием
    антибиотикорезистентности;

  3. обоснование
    адекватной антибиотикотерапии у
    отдельных больных
    в случаях:

а)
выделения микроорганизмов из первично
стерильных жидкостей, орга­нов и
тканей человека;

б)
при выделении микроорганизмов из
первично нестерильных биотопов, оценке
чувствительности должна предшествовать
оценка клинической значимости выделенного
микроорганизма;

в)
инфекций,
резистентных к препаратам эмпирической
терапии;

г)
уникальных инфекций и отсутствии опыта
их терапии;

д)
инфекций, требующих пролонгированной
терапии (каждую неделю терапии проводят
детекцию антибиотикорезистености, так
как возможна смена возбудителей).

Определение
чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам н
ецелесообразно:

  1. для
    предста­вителей нормальной микрофлоры
    человека, при их выделении из естественных
    мест обитания;

  2. для
    видов микроорганизмов, у которых не
    описано резистентных форм к тем или
    иным антибиотикам. Например, Streptococcuspyogenes
    чувст­вительны к пенициллину, поэтому
    проводить определение чувствительности
    к этим препаратам в повседнев­ной
    практике нецелесообразно.

Выбор
антибиотиков, подлежащих тестированию.

В
исследования включают антибиотики,
обладающие природной активностью в
отношении выделенных микроорганизмов
с клинически подтвержденной эффективностью
при соответствующих инфекциях.

В
перечень антибиотиков могут быть
включены 12
дополнительных препарата по запросу
лечащего врача, либо при появлении
новых более эффективных средств.

Этапы
тестирования чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам.

  1. Выделение
    чистой культуры микроорганизмов и
    приготовление
    суспензии микроорганизмов. Прямое
    определение чувствительности без
    выде­ления чистой культуры возможно
    только в исклю­чительных случаях,
    при этом исследова­ние следует
    повторить после выделения чистой
    культуры микроорганизма.

  2. Приготовление
    среды.

  3. Инокуляция среды
    микроорганизмами.

  4. Инкубация.

  5. Учет
    результатов, анализ, формулирование
    рекомендаций по лечению.

  6. Периодический
    контроль качества тестирования с
    использованием штаммов из международных
    коллекций микроорганизмов.

Забор материала для антибиотикограммы

например, гнойДля проведения антибиотикограммы могут быть использованы:

  • кровь;
  • мокрота;
  • моча;
  • каловые массы;
  • сперма;
  • спинномозговая жидкость;
  • мазки со слизистых оболочек;
  • участки омертвевших тканей;
  • гнойные выделения и так далее.

Подготовка к забору анализов на антибиотикограмму

При заборе материала для антибиотикограммы следует:

  • Строго соблюдать условия стерильности. Забор материала должен проводиться в стерильных условиях и стерильными (обеззараженными) инструментами. Любой контакт биологического материала с посторонними предметами (в том числе с руками медсестры) или с воздухом из окружающей среды может исказить результаты антибиотикограммы. Дело в том, что в окружающем нас воздухе и абсолютно на всех окружающих предметах имеется множество различных бактерий. При контакте с исследуемым материалом они непременно попадут в него, вследствие чего во время проведения исследования могут быть выявлены врачом-лаборантом даже в том случае, если изначально материал (кровь, моча и так далее) был стерилен и не содержал возбудителей инфекции. Это приведет к ложноположительному результату исследования и может стать причиной ненужного или неэффективного лечения.
  • Производить забор материала до начала лечения антибиотиками. Как было сказано ранее, целью антибиотикограммы является определить чувствительность бактерий к определенным антибиотикам. Если материал для исследования будет набран после того как пациент начнет получать антибиотики, рост и активность бактерий могут значительно снизиться (из-за антибактериального действия принимаемых препаратов), вследствие чего провести исследование не получится. Следовательно, забор материала рекомендуется проводить до назначения какого-либо антибиотика. Исключением могут быть случаи, когда на фоне длительного лечения антибиотиками состояние пациента не улучшается, что может свидетельствовать об устойчивости возбудителя инфекции к используемым препаратам. В подобных ситуациях забор материала можно проводить даже на фоне лечения антибиотиками.

Забор крови

кроме той, что была указана вышечто облегчит забор кровимаска предотвратит попадание бактерий из дыхательных путей медсестры на кожу пациента во время забора крови

на место прокола при этом прикладывается ватный шарик, смоченный в спирте

Забор мокроты

например, при кашлев течение 3 минутплевательницупри возможности ее следует откашливать прямо в плевательницукоторая стерильнакогда она открытабронхоскопии

Забор мочи

баночкумочевом пузыремыло, гель для душабез использования мыла или других гигиенических средствпервые 2 секунды от начала мочеиспускания

Забор кала

Подготовка к забору кала включает:

  • Гигиену промежности и анальной области. Перед забором материала следует выполнить гигиенические мероприятия, используя мыло или гель для душа. В конце следует тщательно смыть гигиеническое средство с кожи и анальной области большим количеством теплой воды, так как его попадание в каловые массы может исказить результаты исследования.
  • Опорожнение мочевого пузыря. Акт дефекации в норме сопровождается и мочеиспусканием. Однако если в каловые массы попадет моча, это может исказить результаты исследования (например, содержащиеся в моче бактерии могут попасть в набранный материал).

кишечникесли ее нет, можно использовать стерильные ушные палочки или стерильный бинт, который следует намотать на любую палочку в несколько слоев

Забор спинномозговой жидкости

СМЖпозвоночникене содержит бактерийпункциюреаниматолог, инфекционист, неврологкожувыделяется она медленно, примерно по 1 капле в секунду

Классификация антибиотиков

Антибиотики – это группа антибактериальных препаратов, предназначенных для уничтожения или остановки размножения бактерий. Изначально антибиотики получали только естественным путем, сегодня существует огромное количество бактериостатиков, синтезированных в лабораториях (химиотерапевтические препараты). Из-за частой аллергии на пенициллин и устойчивости многочисленных бактериальных штаммов к его воздействию были разработаны различные группы антибиотиков без пенициллина.

Классификация антибиотиков

Есть несколько категорий, по которым можно классифицировать антибиотики. Первая делит их на натуральные и синтетические. Основным критерием разделения является химическая структура антибиотиков, основанная на их механизме действия против бактерий. 

Существуют:

  • бета-лактамные антибиотики (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы, монобактамы);
  • пептидные антибиотики;
  • аминогликозиды;
  • тетрациклин;
  • макролиды.

Макролиды, тетрациклины, карбапенемы, цефалоспорины 3-го, 4-го и 5-го поколений и некоторые пенициллины обладают очень широким спектром действия. Они борются с так называемыми грамположительными и грамотрицательными бактериями, а также нетипичными микроорганизмами. 

Разделение бактерий в соответствии с методом Грама основано на структуре бактериальной клеточной стенки и результирующем цвете, в который бактериальная клетка окрашивает при просмотре под микроскопом.

Цефалоспорины второго поколения, монобактамы и аминогликозиды ингибируют (подавляют) пролиферацию главным образом грамотрицательных бактерий, а цефалоспорины первого поколения предотвращают синтез грамположительных клеток.

Бак посев на флору с определением чувствительности к антибиотикам: расшифровка, нормы.

Наиболее простым в проведении и распространённым в клинической практике, является метод диффузии стандартных бумажных дисков, смоченных антибактериальными препаратами, в чашку Петри, заполненную питательной средой. Диски выкладывают по поверхности агара, соблюдая расстояние два сантиметра от края чашки и друг от друга.

После того, как чаша постоит при комнатной температуре, её перемещают в термостат.

Время выдерживания в термостате для каждых представителей флоры разное. Стандартный срок инкубации составляет от трёх до пяти дней.

Далее, оценивается подавление роста тестируемых бактерий:

  • отсутствие задержки роста, указывает на полную устойчивость микроба к применяемому средству;
  • кольцо, вокруг бумажного диска, диаметром до 1.5 см, свидетельствует в пользу слабой реакции. Данный препарат, также не будет эффективен в лечении;
  • зона от 1.5 до 2.5 см, говорит о стандартной чувствительности и умеренной клинической эффективности;
  • сверхчувствительность к препарату, характеризуется зоной более 2.5 см.

Пример

Пациентке установлен диагноз: хламидийный цервицит. Для эмпирической терапии, в данном случае, рекомендованы Азитромицин или Доксициклин. Выбор остановлен на первом препарате. Начато лечение. Клинически состояние больной улучшилось.

В результатах посева:

Лекарство Диаметр кольца вокруг диска, в см Степень чувствительности
Доксициклина моногидрат 1.8 +
Азитромицин 2.9 ++
Эритромицин 2.7 ++
Левофлоксацин 1.3
Офлоксацин 1.4
Джозамицин 2.4 ++
Амоксициллин/клавуланат 1.0
Моксифлоксацин 1.4
Цефтриаксон 0.3

Расшифровка посева на микрофлору и чувствительность к антибиотикам:

Данные результаты показывают, что лечение было подобрано правильно.

  • возбудитель имеет высокую чувствительность в отношении Азитромицина, также для лечения можно было использовать Эритромицин и Джозамицин;
  • умеренная чувствительность к Докициклину допустимо использовать;
  • устойчивость к Левофлоксацину, Офлоксацину, Моксифлоксацину, Амоксициллина/клавуланату;
  • абсолютная резистентность к Цефтриаксону.

Проведение Е-теста

Определение восприимчивости к противомикробным средствам проходит аналогично дискодиффузионному методу, однако, вместо смоченных антибактериальными средствами дисков, в агар помещается полоска Е-теста. На ней размечены различные уровни концентрации антибиотика, начиная от максимальной и заканчивая минимальной.

Показатель минимальной концентрации подавления определяют в месте перекреста полоски теста и зоны подавления роста.

Этот метод является простым, но достаточно дорогостоящим, в связи с этим, диффузия дисков применяется чаще.

Оцените статью
Рейтинг автора
5
Материал подготовил
Андрей Измаилов
Наш эксперт
Написано статей
116
Добавить комментарий